恩泽康泰-外泌体研究专家
 
外泌体世界

1983年,外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现,1986年Johnstone将其命名为“exosome”,即外泌体。人体几乎所有类型的细胞都能分泌外泌体,外泌体广泛存在于各种体液中,携带多种蛋白质、mRNA、miRNA和脂质类物质等,作为重要的传递信号分子,形成了一种全新的细胞-细胞间信息传递系统,可参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等过程。



一、什么是外泌体?

外泌体是由多泡体(multive bodies,MVB)与胞膜融合后分泌到细胞外环境中的,粒径介于30-150nm的膜性小囊泡,是细胞间信息传递的重要载体。天然存在于各种体液中,包括血液、唾液、尿液、母乳及胸腹水等。



二、外泌体从哪来?到哪去?

外泌体的生成:

1. 各种体细胞通过内吞作用产生内吞囊泡,

2. 内吞囊泡融合形成早期核内体(early endosome),并逐渐变为晚期核内体(late endosome)。

3. 随着胞质内核酸和蛋白等一些“货物”的进入,晚期核内体会产生很多内腔囊泡(intraluminal vesicles,ILVs),并逐渐演变成多泡体(multivesicular body,MVB);

4. 内腔囊泡被释放到胞外,形成外泌体。

(Rong Xu et al. J Clin Invest. 2016)

外泌体的作用机制:

a)外泌体进入受体细胞后,将“货物”释放进入胞质内,并重新形成多泡体;

b)外泌体将“货物”释放进入胞质,但自身与细胞质膜融合;

c) 外泌体上的配体与受体细胞膜上特殊受体结合,既能起到信号传导作用,也能通过内吞作用,将“货物”运入胞内。


三、外泌体怎么分离出来?

目前,外泌体的分离多采用超速离心、尺寸排阻色谱,磁珠免疫捕获、沉淀或过滤等方法。

(Marta Monguió‑Tortajada et al. Cell Mol Life Sci. 2019)


各分离方法优缺点

、如何鉴定外泌体?

MISEV2018对外泌体的表征规定了最小试验要求:

① 总体表征:Western blot或流式细胞术

至少3个阳性(至少包括1个跨膜蛋白和1个细胞溶质蛋白)、1个阴性蛋白质标志物。

② 个体表征:纳米颗粒追踪分析(NTA)和电镜表征(TEM)

电镜或原子力显微镜、单颗粒追踪两种方法互为补充。


五、外泌体能做什么?



六、外泌体研究思路?



七、外泌体研究方案?



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