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【重磅来袭】一款兼顾得率与纯度的外泌体纯化试剂盒Exosupur上市啦!
作者:    发布时间:2019-07-25



首先,
看看外泌体研究官方对外泌体分离方法的评论

SEC+超滤被列为高特异性的外泌体纯化方法,富集的是细胞外囊泡中的某些亚型,而几乎不含有其他非囊泡组分;对于市面上常见的基于PEG原理的kit以及常用的无前处理超离等方法可以最大限度拿到外泌体,但是纯度是非常低的。



对于外泌体内含物研究最多的RNA和蛋白有着得率和纯度双高要求,怎么办?


Exosupur基于SEC+超滤原理,进一步优化流程和装置,使得成分复杂的血浆样本外泌体回收率高达95%,有效去除99.5%的血浆游离杂蛋白,真正地在保证纯度的前提下兼顾了得率,是广大外泌体研究者的不二之选。此外,Exosupur试剂盒只回收固定尺寸范围,产物粒径范围窄,保留完整的外泌体形态和功能,亦是功能学研究的好助手。

Exosupur另外一个专属特色是:供选择的外泌体外参,可以满足对外泌体分离、核酸提取和PCR验证进行全程质控的需求!由于目前没有统一标准的外泌体RNA内参,无法对各个样本提取过程中的效率损失进行很好的表征,导致后期RT-qPCR验证结果存在较大的随机性与不确定性,这是外泌体RNA研究中一个普遍存在的技术难题。为此,Exosupur可提供稳定修饰的人造外泌体(同时包含荧光素与三种不同拷贝数的合成RNA),在外泌体纯化前按比例添加人造外泌体进行共提取即可。该外参的引入可有效的平衡在外泌体纯化与RNA提取过程中引入的误差,有效解决RT-qPCR验证时如何Normalize的问题。


Exosupur分离的外泌体TEM、WB和NTA表征




以荧光外泌体为作为标准品,Exosupur可回收94.87%的荧光外泌体,去除99.44%的血浆蛋白,从Western Blot中可以看出血浆中主要的miRNA结合蛋白更少,杂蛋白更少。

高纯度外泌体更有利于RNA组学、蛋白组学及细胞功能学的研究。

除了通过Western Blot检测发现Exosupur对于目的杂蛋白的去除率高外,我们还通过外泌体颗粒与蛋白含量的比值从整体看Exosupur获得的外泌体纯度如何。通过几种纯化方法比较发现Exosupur得到的外泌体particle数与蛋白含量比值最高,表明Exosupur分离的外泌体纯度更高,杂蛋白含量更低。



Exosupur对于低表达量的长RNA研究有何益处呢?对SALC25A6和PGK1的RT-qPCR检测发现,相比超离和市面常见试剂盒,Exosupur能够得到更高丰度的长链RNA,更有利于mRNA + LncRNA研究。

外泌体miRNA研究时,以其大量来源于RNP结合的问题而困扰诸多研究者。通过比较不同外泌体纯化方法的miRNA实时定量结果可见,由于Exosupur富集的外泌体得率更高、纯度更高,使得外泌体的miRNA定量值更高,而游离miRNA定量值非常低,能够更准确分析外泌体来源miRNA

酶消化试验也进一步证实了Exosupur得到的RNA更多的是来源于囊泡,而非囊泡外的游离RNA。


同一样本,使用不同起始提及在外泌体分离、RNA提取、RT-qPCR定量等过程均会导致随机误差,基于Exosupur的荧光外泌体外参(ER)进行Normaliza后使各定量结果一致性好。


综上,


Exosupur集高得率与高纯度于一身的外泌体研究利器,可有效解决外泌体研究中miRNA来源不明、lncRNA含量低、血浆杂蛋白占比高、杂质污染外泌体结构破坏影响功能学研究等实际难题。

根据不同的样本体积需求,Exosupur有三种规格,大包装可以处理3ml*3*5=45ml样本,中包装可以处理1ml*4*5=20ml样本,小包装可以处理0.5ml*8*5=20ml样本。Exosupur可以兼容血浆、血清、细胞上清、胸水、腹水、脑脊液和尿液等多种样本类型,从上样到分离出外泌体仅需30min,操作简便,分离的外泌体重复性好,结构完整,颗粒均一性好。

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