恩泽康泰-外泌体研究专家
 

外泌体RNA组学研究的难点:

1. miRNA——来源不明

2. 长RNA——丰度低

3. RNA验证——验证不出来

恩泽康泰根据以上难点提供外泌体RNA组学(miRNA测序、长RNA测序、全转录组测序和qPCR验证)整套解决方案



外泌体全转录组测序


1. 高纯度兼顾回收率的外泌体纯化——Exosupur试剂盒

以SEC+超滤为原理的Exosupur试剂盒,富集的囊泡更纯,可以获得更多囊泡来源的RNA,能更准确分析外泌体来源miRNA,能得到更高丰度的长链RNA


 

2.最优的RNA提取试剂盒

 

不同RNA提取试剂盒效率差异大,尤其对外泌体的微量RNA影响更大。因此广泛比较个提取试剂盒,选择最优试剂盒。


3.严格的RNA质控,提高项目成功率,降低客户风险

 


4. UMiR+超微量建库测序技术

在PCR扩增前,在所有的miRNA分子上加入分子条形码,针对外泌体微量RNA,可有效排除在建库时PCR偏倚,准确还原样本的原始状态。
 

基于一链合成-Smart技术的链特异性和pg级建库,可从外泌体皮克级总RNA中制备出高效的外泌体长链RNA测序文库。

从文库浓度+峰形+峰位置+峰宽度多维度出发对制备好的文库进行质控,多管齐下,保证最终高质量数据的产出。



5. 外泌体qPCR验证——多重因素的多管齐下




外泌体miRNA测序

利用特异性分子标签(Unique Molecular Identifiers,UMI)的建库方法,基于二代测序技术对外泌体miRNA进行鉴定、定量和差异表达等分析,可对外泌体miRN在疾病发生发展、标志物、调控机制等方面进行研究


产品优势

外泌体纯度高:Exosupur试剂盒可获得高纯度外泌体,从源头保证miRNA测序的准确性

起始量低:支持低至1ng的样本RNA起始量

定量精准:基于UMI的微量建库策略,排除PCR偏倚及测序错误对miRNA定量的影响,可准确还原样本中miRNA的原始状态,并提高与验证结果的一致性

分辨率高:可识别小RNA单个碱基的差异

分析严谨:分析流程结合外泌体特征,并设置严格的筛选条件用于发现新miRNA

质控严格:从外泌体分离、RNA提取到建库和测序,层层环节进行质控

私人订制:私人订制的项目方案,提供一站式外泌体miRNA研究解决方案

项目经验丰富:外泌体miRNA研究项目丰富,涉及数万例样本数量、涵盖10+种样本类型,在外泌体领域发表的SCI超60篇,在外泌体文章发表方面经验丰富



外泌体长RNA测序

外泌体长链RNA测序是采用去核糖体链特异性的建库方法,对mRNA、lncRNA等长RNA进行测序研究,从而快速全面准确地获得与特定生物学过程相关的长RNA转录本数据信息,可应用于疾病标志物、细胞分化和发育、调控机理及基因药物的研究等方面


产品优势

外泌体纯度高:Exosupur试剂盒可获得高纯度外泌体,从源头保证长RNA测序的准确性

起始量低:可低至pg级的样本RNA起始量,建库成功率高,极大避免承担风险建库后果

定量精准:去rRNA的微量链特异性建库,定量精准,保留了完整的lncRNA和mRNA序列,以及序列方向性

分析严谨:分析流程结合外泌体特征,并设置严格的筛选条件用于lncRNA鉴定分析

质控严格:从外泌体分离、RNA提取到建库和测序,层层环节进行质控

私人订制:私人订制的项目方案,提供一站式外泌体长RNA研究解决方案

项目经验丰富:外泌体长RNA研究项目丰富,涉及几千例样本数量、涵盖10+种样本类型,在外泌体领域发表的SCI超60篇,在外泌体文章发表方面经验丰富


外泌体qPCR验证

通过qPCR即使可对外泌体目的RNA标志物(miRNA、mRNA、lncRNA)进行验证,以研究其在不同样本中的表达差异。


产品优势

选择最优提取试剂盒:对不同提取试剂盒得到的RNA进行了不同基因的qPCR检测,选择了提取效率最高的试剂盒;
选择最优反转录试剂盒:比较了不同的反转录试剂盒在不同起始浓度下的反转录效率,选择了反转效率最高的试剂盒;
丰富的引物、探针设计经验:100000+的引物设计经验,优化的引物探针检测的Ct值更小、灵敏度更高、荧光信号更强;
完善的验证体系:具有成熟的、可控的、行业认可的、可发高分杂志的验证体系,证实外泌体RNA的囊泡来源;
丰富的项目经验:外泌体标志物qPCR反应80000+,涉及10+样本类型,qPCR验证工作在外泌体顶级杂志上有发表,在外泌体RNA标志物的qPCR验证上有丰富的经验



外泌体蛋白组学服务

产品介绍

外泌体内含丰富的核酸、蛋白和脂质信息,与细胞信号转导功能相关,参与疾病进展、肿瘤血管生成、免疫监视等多个环节。外泌体中的蛋白质是参与疾病发生、发展的重要组成部分。以液相色谱和串联质谱联用(LC-MS/MS)为基础的外泌体蛋白质组学研究,可以获得外泌体中的蛋白质表达谱、差异蛋白表达谱、多肽谱、差异多肽谱以及蛋白质相互作用信息,可应用于外泌体中的蛋白标志物和多肽标志物的发现、功能蛋白和多肽的挖掘、信号通路和分子机理机制等研究。


定量方法

蛋白定量采用非标记定量(Label-free)的方法,通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析,无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准,只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据,比较不同样品中相应肽段的信号强度,从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。


技术优势

1.外泌体得率高、纯度高;

2.鉴定的蛋白非囊泡来源少;

3.鉴定的蛋白种类多;

4.无需昂贵的稳定同位素标签标记样本,实验成本低;

5.信息量大,样本数不受限制,可用于大规模数量样本检测;

6.对样本的操作较少,并且不受样品条件的限制,所需样本量低;

7.可以检测到的肽段动态范围可以达到4个数量级以上,提高了低丰度蛋白质的检测效率、非标记定量准确性。


产品优势

1.外泌体纯度高Exosupur试剂盒可获得高纯度外泌体,从源头保证蛋白检测的准确性。而低纯度外泌体会引入大量杂蛋白,掩盖囊泡蛋白的真实信号,进而导致检测到的蛋白数量少,结果假阳性

2.因样本制宜根据不同的样本形式选择最优的分离方法,保证最终高质量数据的产出。例如,如果是类似血浆这种高复杂性样本,会选择不同分离方法的结合,优势互补,提高外泌体质量。

3.起始量低所需样本量低,支持低至几μg的样本总蛋白起始量。

4.数据质量高可鉴定到多数量、高质量的外泌体蛋白,经典的外泌体的标志性蛋白,如CD9、CD81、CD63等丰度排名在top 10%以内

5.质控严格对外泌体分离、蛋白提取、质谱前等环节进行质控

6.平台可靠鉴定到的外泌体蛋白数量与文章报道的发现——相当或较高,有利于样本间的差异分析;大部分能注释到外泌体数据库;高度可靠的数据是高水平文章发表的基石

7.私人订制私人订制的项目方案,提供一站式外泌体蛋白组研究解决方案

8.项目经验丰富外泌体研究项目丰富,涉及数万例样本数量、涵盖10+种样本类型












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