产品介绍

根据国际细胞外囊泡研究协会（ISEV）针对囊泡研究提出的2018最小试验要求（MISEV2018），细胞外囊泡（EVs，含外泌体）鉴定主要分为总体表征和个体表征两部分：

总体表征

蛋白鉴定：应用Western Blot或流式细胞术对EVs的阳性标志物和阴性标志物进行表征。其中包括至少3个阳性（至少包括1个跨膜蛋白和1个细胞溶质蛋白）、1个阴性蛋白质标志物。

个体表征

粒径分析：应用动态光散射(DLS)或纳米颗粒跟踪分析(NTA)方法，对粒径分布进行分析

形态表征：应用透射电子显微镜（TEM）或原子力显微镜（AFM）方法对EVs的形态及粒径进行表征

电镜检测

透射电子显微镜观察法（TEM）是从形态和大小上对外泌体进行鉴定。通过负染的方法，在高倍放大下直接观察单个外泌体的形态结构和大小。

检测仪器：透射电子显微镜（HITACHI，H-7650）

样本要求：BCA浓度300-400ng/μl，体积10μl；避免反复冻融，4℃保存，冰袋运输。

粒径检测

粒径分析是从整体上对外泌体大小的分布情况进行检测，具有准确、快速、重复性好等优点，是对现有外泌体鉴定方法的良好补充。

检测仪器：Particle Metrix（ZetaView）                           

样本要求： 避免反复冻融，4℃保存，冰袋运输。

Western Blot检测

Western blot是通过抗原抗体特异性结合的原理，检测外泌体标志蛋白，从蛋白质层面对外泌体进行鉴定。常用的外泌体标志蛋白包括CD63、TSG101及Alix等。

检测方法：ECL化学发光，传统胶片曝光或者专用曝光仪器。

样本要求：血浆样本BCA量60ug，＞0.5μg/μl；细胞上清BCA量40μg，＞0.5μg/μl；冰袋运输。