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外泌体鉴定服务

产品介绍

根据国际细胞外囊泡研究协会(ISEV)针对囊泡研究提出的2018最小试验要求(MISEV2018),细胞外囊泡(EVs,含外泌体)鉴定主要分为总体表征和个体表征两部分:

总体表征

蛋白鉴定:应用Western Blot或流式细胞术对EVs的阳性标志物和阴性标志物进行表征。其中包括至少3个阳性(至少包括1个跨膜蛋白和1个细胞溶质蛋白)、1个阴性蛋白质标志物。

个体表征

粒径分析:应用动态光散射(DLS)或纳米颗粒跟踪分析(NTA)方法,对粒径分布进行分析

形态表征:应用透射电子显微镜(TEM)或原子力显微镜(AFM)方法对EVs的形态及粒径进行表征


电镜检测

透射电子显微镜观察法(TEM)是从形态和大小上对外泌体进行鉴定。通过负染的方法,在高倍放大下直接观察单个外泌体的形态结构和大小。

检测仪器:透射电子显微镜(HITACHI,H-7650)

样本要求:BCA浓度300-400ng/μl,体积10μl;避免反复冻融,4℃保存,冰袋运输。



粒径检测

粒径分析是从整体上对外泌体大小的分布情况进行检测,具有准确、快速、重复性好等优点,是对现有外泌体鉴定方法的良好补充。

检测仪器:Particle Metrix(ZetaView)                           

样本要求: 避免反复冻融,4℃保存,冰袋运输。



Western Blot检测

Western blot是通过抗原抗体特异性结合的原理,检测外泌体标志蛋白,从蛋白质层面对外泌体进行鉴定。常用的外泌体标志蛋白包括CD63、TSG101及Alix等。

检测方法:ECL化学发光,传统胶片曝光或者专用曝光仪器。

样本要求:血浆样本BCA量60ug,>0.5μg/μl;细胞上清BCA量40μg,>0.5μg/μl;冰袋运输。



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